অটোগ্রাফা ক্যালিফোর্নিকা মাল্টিপ্লেনিউক্লিয়োপলিহেড্রোভাইরাস (AcMNPV) এর কীটনাশক কার্যকারিতা এবং স্পোডোপটারা ফ্রুগিপার্ডার লার্ভাগুলিতে জৈব নিয়ন্ত্রণের প্রভাব

বিমূর্ত

ফল আর্মিওয়ার্ম, স্পোডোপ্টেরা ফ্রুগিপারডা, ভুট্টার সবচেয়ে গুরুত্বপূর্ণ কীটপতঙ্গগুলির মধ্যে একটি, যা নতুনভাবে চীনে আক্রমণ করেছে। এর নিয়ন্ত্রণ প্রভাব নির্ধারণের জন্য। অটোগ্রাফা ক্যালিফোর্নিকা মাল্টিপল নিউক্লিওপলিহেড্রোভাইরাস (AcMNPV) S.frugiperda-এর লার্ভার উপর, S.frugiperda-এর উপর AcMNPV-এর কীটনাশক কার্যকলাপ এবং জৈব-নিয়ন্ত্রণ প্রভাব জৈবসার এবং ক্ষেত্র কার্যকারিতা পরীক্ষার পদ্ধতি দ্বারা অধ্যয়ন ও বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। ফলাফলগুলি দেখিয়েছে যে মিডিয়া (এলসি) নিয়ন্ত্রণ করেছে।₅₀)এর AcMNPV 2-এর উপর কাজ করছে^ndS. Frugiperda এর ইনস্টার লার্ভা ছিল 2.9x 10⁷PIB/mL. গড় নিয়ন্ত্রণ কার্যকারিতা 10⁷PIB/mL AcMNPV+Bt সাসপেনশন(1500 mL/hm²) S.frugiperda তে 10 তারিখে 68.99% ছিল^মদিন এবং 15 তারিখে 66.87%^মপ্রশাসনের পরের দিন।অবশেষে, DNAMAN 6.0 সফ্টওয়্যারটি মৃত পোকামাকড়ের ডিএনএ সমতা শনাক্ত করার জন্য ব্যবহার করা হয়েছিল, এবং ফলাফলে দেখা গেছে যে মৃত পোকা এবং S．Frugiperda-এর polh,lef-8 এবং lef-9 জিনের ক্রম ছিল 100 % অভিন্ন৷ উপরের সমস্ত ফলাফলগুলি আরও যাচাই করতে পারে যে AcMNPV S.frugiperda নিয়ন্ত্রণে একটি মুখ্য ভূমিকা পালন করতে পারে৷ এটি প্রস্তাবিত যে 10⁷PIB/mL AcMNPV＋বিটি সাসপেনশন (1500mL/hm²উচ্চ তাপমাত্রা এবং আলোর প্রভাব এড়াতে S.frugiperda এর কচি লার্ভা দেখা দেওয়ার শীর্ষে প্রয়োগ করা উচিত এবং রৌদ্রোজ্জ্বল দিনে বিকেল 4:00-5:00 পরে প্রয়োগ করা উচিত, যাতে ভাইরাসের প্রস্তুতি আরও ভালভাবে খেলতে পারে। ভূমিকা এবং S.frugiperda উপর এর নিয়ন্ত্রণ প্রভাব উন্নত.

কীওয়ার্ড: AcMNPV;স্পোডোপ্টেরা ফ্রুগিপারডা;লেপিডোপ্টেরানপেস্ট;লার্ভাজৈব কীটনাশক;AcMNPV＋Bt সাসপেনশন;কীটনাশক কার্যকলাপ;সবুজ প্রতিরোধ এবং নিয়ন্ত্রণ

স্পোডোপ্টেরা ফ্রুগিপারদা হল একটি সর্বভুক পরিযায়ী কীটপতঙ্গ যা 2019 সালে মায়ানমার থেকে প্রথম চীনে প্রবেশ করেছিল এবং চীনের 26টি প্রদেশ ও পৌরসভার 1,518টি জেলায় দ্রুত ছড়িয়ে পড়েছে, যা চীনের খাদ্য নিরাপত্তার জন্য মারাত্মক হুমকি হয়ে দাঁড়িয়েছে। এখন পর্যন্ত, আর্মিওয়ার্ম নিয়ন্ত্রণ কৌশলে, আর্মিওয়ার্মের প্রাদুর্ভাব নিয়ন্ত্রণ এখনও রাসায়নিক কীটনাশকের ব্যাপক ব্যবহারের উপর নির্ভর করে।রাসায়নিক কীটনাশকের অত্যধিক ব্যবহার সহজেই কীটপতঙ্গ প্রতিরোধ, পুনরায় ছড়িয়ে পড়া এবং পরিবেশের অবশিষ্টাংশ এবং দূষণের কারণ হতে পারে।গুরুতর সমস্যাগুলির একটি সিরিজ আধুনিক কৃষির টেকসই উন্নয়নকে গুরুতরভাবে সীমিত করেছে। অতএব, জৈব নিয়ন্ত্রণ পদ্ধতি বা জৈব কীটনাশক প্রতিস্থাপনের ব্যবহার।আর্মিওয়ার্ম নিয়ন্ত্রণের জন্য কীটনাশকের ব্যবহার আরও বেশি গুরুত্বপূর্ণ হয়ে উঠছে এবং ক্রমবর্ধমান মনোযোগ পেয়েছে।

অটোগ্রাফা ক্যালিফোর্নিকা মাল্টিপল নিউক্লিওপলিহেড্রোভাইরাস AcMNPV হল একটি মাল্টি-গ্রেইন এমবেডেড নিউক্লিয়ার পলিহেড্রোসিস ভাইরাস যা আর্গিরিয়া আলফালফার লার্ভা থেকে বিচ্ছিন্ন। এটি 30 টিরও বেশি ধরণের লেপিডোপ্টেরান কীট যেমন বিট মথ, বাঁধাকপি মথ, আর্গিরিয়া আর্জিস্টেরা, ক্যাবেজ মথ, এবং ক্যালিস্টেরা দ্য লার্ভাকে ক্রস-সংক্রমিত করতে পারে। বিটি এবং অন্যান্য কীটনাশক এবং অ-লক্ষ্যযুক্ত কীটপতঙ্গ ভাইরাসের সাথে মিশ্রিত প্রকারের সিনার্জিস্ট হিসাবে অনেক নকটুইডি কীটপতঙ্গের উপর সুস্পষ্ট সিনেরজিস্টিক প্রভাব রয়েছে এবং কীটনাশক বর্ণালীকে আরও বিস্তৃত করে এবং কীটনাশক প্রভাবকে উন্নত করে।AcMNPV হল পোকামাকড়ের ভাইরাসের একটি নতুন বায়োপেস্টিসাইড যা উহান ইউনিওসিস বায়োলজিক্যাল টেকনোলজি কোং, লিমিটেড দ্বারা তৈরি করা হয়েছে।এটি আরজিরিয়া আলফালফা নিউক্লিয়ার পলিহেড্রোসিস ভাইরাস এবং বিটি শক্তিশালী ভাইরাস সিনারজিস্টের সংমিশ্রণ।ভাল কীটনাশক কার্যকলাপ সহ, A ব্যাপকভাবে শাকসবজি, ফল গাছ, ধান এবং অন্যান্য ক্ষেত্রে প্রয়োগ করা হয়েছে।এই কাগজে, স্পোডোপ্টেরা ফ্রুগিপারদার বিরুদ্ধে অটোগ্রাফা ক্যালিফোর্নিকা মুল-টাইপল নিউক্লিওপলিহেড্রোভাইরাস (AcMNPV) এর কীটনাশক কার্যকলাপ এবং জৈব নিয়ন্ত্রণ প্রভাব পরীক্ষাগার কার্যকলাপ পরীক্ষা এবং ক্ষেত্র পরীক্ষা দ্বারা সনাক্ত এবং মূল্যায়ন করা হয়েছিল, যাতে নিউক্লিয়ার পলিহেড্রোসিস ভাইরাসের ব্যাপক প্রয়োগের জন্য ডেটা সহায়তা প্রদান করা যায়। ভুট্টার মধ্যে Spodoptera frugiperda এর জৈবিক নিয়ন্ত্রণ।এটি আর্মিওয়ার্ম নিয়ন্ত্রণে AcMNPV প্লাস Bt-এর সাসপেনশন এজেন্টের নিবন্ধন ও প্রয়োগের তাত্ত্বিক ভিত্তি প্রদান করে।

1.উপকরণ এবং পদ্ধতিসমূহ

1.1ভাইরাস এবং জৈবিক এজেন্ট পরীক্ষা করুন

অটোগ্রাফা ক্যালিফোর্নিকা মাল্টিপল নিউক্লিওপলিহেড্রোভাইরাস (AcMNPV) পরীক্ষিত ভাইরাসটি ছিল 20 মে, 2019 তারিখে, হুবেই প্রদেশের জিয়ানতাও শহরের ভুট্টা ক্ষেত থেকে স্পোডোপ্টেরা ফ্রুগিপারদা সংগ্রহ করা হয়েছিল এবং উহান টেকনোলজি ইউনিওসিস-এর পরীক্ষাগারে ভাইরাস সংক্রমণ স্ক্রীনিং পরীক্ষা করা হয়েছিল। , LTD.(যেটিতে অটোগ্রাফা ক্যালিফোর্নিকা মাল্টিপলনিউক্লিওপলিহেড্রোভাইরাস এসিএমএনপিভির স্পোডোপ্টেরা ফ্রুগিপারডার বিরুদ্ধে উচ্চ সংক্রামক কার্যকলাপ রয়েছে), স্পোডোপ্টেরা ফ্রুগিপারডার লার্ভা বৃদ্ধি এবং বংশবিস্তার করার জন্য উত্থাপিত হয়েছিল। ভাইরাস দ্বারা সংক্রমিত মৃত লার্ভাগুলিকে জল দিয়ে মাটিতে ফিল্টার করা হয়েছিল, 3 স্তরের মধ্যে দিয়ে ফিল্টার করা হয়েছিল। 600r/min এবং 300r/min এ সেন্ট্রিফিউজ করা হয়েছিল। মাইক্রোকাউন্ট ছিল 1.8 ×10¹⁰virulent polyhedra per mL(Polyhedralinclusionbody PIB), অর্থাৎ পলিহেড্রোসিস ভাইরাসের বিশুদ্ধ প্রযুক্তিগত গ্রেড পেতে (1.8 x 10)¹⁰PIB/mL), কম তাপমাত্রায় সংরক্ষিত এবং সরাইয়া রাখা।

পরীক্ষিত জৈবিক এজেন্টটি ছিল অটোগ্রাফা ক্যালিফোর্নিয়া নিউক্লিয়ার পলিহেড্রোসিস। সংক্ষিপ্ত AcNPV.Bt(1.0 ×107 PIB/mL) এর জন্য ব্যাসিলাস থুরিংজিনসিস।এটি উহান ইউনিওসিস বায়োলজিক্যাল টেকনোলজি কোং, লিমিটেড দ্বারা বিকশিত এবং এর সহায়ক সংস্থা উহান চুকিয়াং বায়োলজিক্যাল টেকনোলজি কোং, লিমিটেড দ্বারা উত্পাদিত।

1.2পোকামাকড় পরীক্ষা করুন

পরীক্ষামূলক পোকাটি ছিল স্পোডোপ্টেরা ফ্রুগিপারডা।20 জুলাই, 2019 তারিখে, স্পোডোপ্টেরা ফ্রুগিপারদার লার্ভাগুলি হুবেই প্রদেশের দাচাংজেন টাউন, টংশান কাউন্টির বাঙ্কিয়াও গ্রামের গ্রীষ্মকালীন ভুট্টা ক্ষেত থেকে সংগ্রহ করা হয়েছিল এবং হুবেই কৃষি একাডেমীর উদ্ভিদ সুরক্ষা মাটি ও সার গবেষণা ইনস্টিটিউটের পরীক্ষাগারে ফিরিয়ে আনা হয়েছিল। বিজ্ঞান। তাজা এবং কোমল ভুট্টা পাতা নিষ্পত্তিযোগ্য প্লাস্টিকের পেট্রি ডিশে (ব্যাস 8 সেমি, উচ্চতা 3 সেমি) একক মাথা খাওয়ানো হয়েছিল।এর অভ্যন্তরীণ খাওয়ানোর শর্তগুলি ছিল :(25±1) ℃ এবং আপেক্ষিক আর্দ্রতা 60% -70%, ফটোপিরিয়ড হল 16L:8D।একাধিক প্রজন্মের প্রজননের পর, তাজা এবং জীবাণুমুক্ত ডিমের ব্লক ব্যবহারের জন্য রাখা হয়।

1.3অটোগ্রাফা ক্যালিফোর্নিকা মাল্টিপল নিউক্লিওপলিহেড্রোভাইরাস (AcMNPV) এর স্পডোপটেরা ফ্রুগিপারডার পরীক্ষাগার কার্যকলাপ

ছয় ঘনত্ব গ্রেডিয়েন্ট, 1.0 × 10⁹, 1.0 × 10⁸, 1.0 × 10⁷, 1.0 × 10⁶, 1.0 × 10⁵, 1.0 × 10⁴এই পরীক্ষায় ডিজাইন করা হয়েছিল। প্রথমে, AcNPV এর TC 1.0 × 10 এ পাতলা করা হয়েছিল⁹PIB/mL, এবং তারপর 10 বার পাতলা করা হয়েছে বিভিন্ন ঘনত্বের সাথে অন্যান্য তরল পেতে৷ পরীক্ষাটি ফাঁকা নিয়ন্ত্রণের সাথে চিকিত্সা করা হয়েছিল৷ মোট 7টি প্রক্রিয়া সম্পাদিত হয়েছিল, প্রতিটি প্রক্রিয়া 3 বার পুনরাবৃত্তি হয়েছিল৷

লিফ সেগমেন্ট খাওয়ানোর পদ্ধতি গৃহীত হয়েছিল, অর্থাৎ, ভুট্টার তাজা কচি পাতা (দৈর্ঘ্য 2 সেমি × প্রস্থ 2 সেমি) প্রথমে ভাইরাস সাসপেনশন স্প্রে দিয়ে চিকিত্সা করা হয়েছিল, তারপর লার্ভাকে খাওয়ানো হয়েছিল এবং পেট্রি ডিশে একক মাথা খাওয়ানো হয়েছিল।খাওয়ানোর স্ট্রিপগুলি ছিল: তাপমাত্রা (25±1)℃, পর্যায় থেকে আর্দ্রতা (60% ~ 70%), ফটোপিরিয়ড (16L:8D)। বিষাক্ত ভুট্টা পাতা খাওয়ার পরে, তাজা অ-বিষাক্ত ভুট্টা পাতা যোগ করতে হবে। অবিলম্বে। আর্মিওয়ার্মের 48 সেকেন্ড ইনস্টার লার্ভা বারবার চিকিত্সা করা হয়েছিল। রেফারেন্স পার্ট 9{9-11}, মথ পরিবারের কোষ এবং হোস্টে ভাইরাসের বিস্তারের পরিবর্তন বিবেচনা করে, ভাইরাসের কারণে মৃত পোকামাকড়ের সংখ্যা এবং সংক্রমণের 7 এবং 10 দিনে মোট মৃত পোকামাকড়ের সংখ্যা তদন্ত করা হয়েছিল এবং মৃত্যুর হার গণনা করা হয়েছিল এবং LC50 গণনা করা হয়েছিল।

1.4আর্মিওয়ার্ম লার্ভার উপর 10 মিলিয়ন AcMNPV.Bt সাসপেনশনের নিয়ন্ত্রণ প্রভাবের উপর মাঠ পরীক্ষা

ক্ষেত্র কার্যকারিতা পরীক্ষাটি হুবেই প্রদেশের টংশান কাউন্টির চুয়াংওয়াং টাউন, জিয়াওয়ুয়ান গ্রামের গ্রীষ্মকালীন ভুট্টা ক্ষেতে পরিচালিত হয়েছিল।পরীক্ষার প্লট মোট 1500 মি^২, মাটির ধরন হল ক্যালসিক মাটি, pH মান 6.8, জৈব পদার্থের পরিমাণ 13.9%, এবং উর্বরতা মাঝারি থেকে উচ্চ। ভুট্টা সারা বছর রোপণ করা হয়, এবং ভুট্টার জাত হল Xiyu নং 3। 13 জুলাই ,2020, 45% যৌগিক সার 750kg//hm^২বেস সার হিসাবে প্রয়োগ করা হবে এবং বপন করা হবে।2019 সাল থেকে, এই ক্ষেত্রটিতে ফল আর্মিওয়ার্মের একটি গুরুতর ঘটনা ঘটেছে।

মোট 10 মিলিয়ন AcMNPV.BT সাসপেনশন (1500mL/hm²) এবং 15% emamectin benzoate.Indocarb সাসপেনশন (300mL/hm²), সাধারণত ব্যবহৃত কীটনাশক এবং ফাঁকা নিয়ন্ত্রণ 3টি চিকিত্সার মাধ্যমে চিকিত্সা করা হয়েছিল।প্রতিটি চিকিত্সা 4 বার পুনরাবৃত্তি হয়েছিল, মোট 12টি পরীক্ষামূলক প্লট সহ, প্রতিটি 100 মিটার এলাকা জুড়ে²

26 অগাস্ট, 2020-এর বিকেলে (যখন স্পোডোপ্টেরা ফ্রুগিপারডার লার্ভা ঘন ঘন হয়), সন্ধ্যায় একবার কীটনাশক স্প্রে করুন।Lebang ব্র্যান্ড 3WBJ-16DZ মাল্টি-ফাংশন ব্যাকপ্যাক ইলেকট্রিক স্প্রে ব্যবহার করা হয়, যার কাজের চাপ 0.40~ 0.60 MPa, 1mm এর ছিদ্র ব্যাস, এবং প্রবাহের হার 60~85L/h।কীটনাশক প্রয়োগের দিনটি রৌদ্রোজ্জ্বল, তাপমাত্রা 23-32 ℃।আবেদনের পর ১ম, ৩য়, ৫ম, ৭ম, ১০ম এবং ১৫তম দিনে সমীক্ষা চালান।তদন্তের সময়, প্রতিটি প্লট থেকে 10টি র্যান্ডম স্যাম্পলিং পয়েন্ট নেওয়া হয়েছিল এবং প্রতিটি পয়েন্টে 10টি উদ্ভিদ ক্রমাগত জরিপ করা হয়েছিল, মোট 100টি গাছপালা।প্রতিটি ভুট্টা গাছে জীবিত পোকামাকড়, মৃত্যু, বিষক্রিয়া এবং প্রাকৃতিক শত্রুর সংখ্যা রেকর্ড করা হয়েছিল।প্রাসঙ্গিক গণনার সূত্রটি নিম্নরূপ;

পোকামাকড়ের হ্রাসের হার = (প্রয়োগের আগে জীবিত পোকার সংখ্যা - প্রয়োগের পরে জীবিত পোকার সংখ্যা) / প্রয়োগের আগে জীবিত পোকার সংখ্যা

প্রতিরোধ ও নিয়ন্ত্রণ প্রভাব=(চিকিৎসা এলাকায় পোকার হার হ্রাস- নিয়ন্ত্রণ এলাকায় পোকার হার হ্রাস)/(100- নিয়ন্ত্রণ এলাকায় পোকার হার হ্রাস)*100%

1.5ACMNPV এর আণবিক সনাক্তকরণ

1) ভাইরাসের নমুনা পরীক্ষা করুন।ইনডোর কার্যকলাপ নির্ধারণের জন্য ACMNPV মাদার লিকার নির্বাচন করুন (নমুনা 1), জৈবিক প্রস্তুতি 10 মিলিয়ন ACMNPV.Bt SC (নমুনা 2), ক্ষেত্র কার্যকারিতা পরীক্ষার পর ভাইরাস সংক্রামিত পোকামাকড়ের মৃতদেহ (নমুনা 3), এবং আর্মিওয়ার্মের দ্বিতীয় প্রজন্মের লার্ভা দ্বারা সংক্রামিত। 10 মিলিয়ন ACMNPV.Bt-এর মধ্যে AcMNPV-এর ফল আর্মিওয়ার্ম লার্ভার বিরুদ্ধে ব্যাকটেরিয়াঘটিত কার্যকলাপ আছে কিনা তা যাচাই করার জন্য নমুনা 3 (নমুনা 4) এ সংগৃহীত পোকামাকড়ের মৃতদেহ পরীক্ষার ভাইরাসের নমুনা হিসাবে।

2) ডিএনএ নিষ্কাশন।1.0 মিলি অ্যাসিএমএনপিভি নমুনা নিন, 99.0 মিলি পাতিত জল যোগ করুন এবং 1 মিনিটের জন্য পুঙ্খানুপুঙ্খভাবে দোলান।দোলনের পরে 300μL সাসপেনশন নিন, 100μL ক্ষারীয় ক্র্যাকিং দ্রবণ যোগ করুন, 30 মিনিটের জন্য 37 ℃ এ জল স্নান করুন।200μL Tris·HCl বাফার যোগ করুন এবং 8 মিনিটের জন্য 10000 r/min এ সেন্ট্রিফিউজ করুন।সুপারনাট্যান্টটিকে একটি সেন্ট্রিফিউজ টিউবে নিয়ে যান, 5μL প্রোটিজ কে এবং 60 μL SDS যোগ করুন, 2 ঘন্টার জন্য 65 ℃ এ জল স্নান করুন, সরান এবং ঘরের তাপমাত্রায় ঠান্ডা করুন।650μL মিক্স এল ট্রিস স্যাচুরেটেড ফেনল ভালভাবে যোগ করুন, 10000 r/min এ 5 মিনিটের জন্য সেন্ট্রিফিউজ করুন এবং সুপারনাট্যান্টটিকে একটি নতুন সেন্ট্রিফিউজ টিউবে নিয়ে যান।ফেনল এবং ক্লোরোফর্মের 650μL মিশ্রিত তরল (ভলিউম অনুপাত 1:1) মিশ্রণ যোগ করুন, 5 মিনিটের জন্য 10000 r/min এ সেন্ট্রিফিউজ করুন, এবং তারপর সুপারনাট্যান্টটিকে একটি নতুন সেন্ট্রিফিউজ টিউবে নিয়ে যান।ক্লোরোফর্ম এবং আইসোঅ্যামিল অ্যালকোহলের 650μL মিশ্রিত তরল যোগ করুন (ভলিউম অনুপাত 24:1), 10000 r/min এ 5 মিনিটের জন্য সেন্ট্রিফিউজ করুন এবং অবশেষে একটি নতুন সেন্ট্রিফিউজ টিউবে সুপারনাট্যান্ট নিন।একটি স্পেকট্রোফটোমিটার ব্যবহার করে ডিএনএ ঘনত্ব পরিমাপ করুন।

3) পিসিআর পরিবর্ধন।T3 সুপার মিক্স স্ট্যান্ডার্ড সিস্টেম ব্যবহার করে: নমুনা DNA 2 μL. 0.5μL প্রাইমার আগে এবং পরে, T3 সুপার মিক্স 18μL এবং ddH₂O7μL।পিসিআর পরিবর্ধন অবস্থা হল 95 ℃।প্রি-ডিনাচুরেশনের 3 মিনিটের পরে, নিম্নলিখিত চক্রগুলি সঞ্চালিত হয়: 15 সেকেন্ডের জন্য 98 ℃, 20 সেকেন্ডের জন্য 52 ℃, 20 সেকেন্ডের জন্য 72 ℃ এবং অবশেষে 5 মিনিটের জন্য 72 ℃, সম্পূর্ণভাবে 42 বার চক্র।

4) ডিএনএ অ্যাগারোজ জেল ইলেক্ট্রোফোরেসিস।PCR পরিবর্ধন পণ্য 2μL এবং 5 kb ডিএনএ মার্কার নিন এবং অ্যাগারোজ জেলে রাখুন এবং 20 মিনিটের জন্য 180 V এ ইলেক্ট্রোফোরেটিক রাখুন।ইলেক্ট্রোফোরসিসের পরে, জেল ইমেজিং সিস্টেমে পিসিআর পণ্যগুলি পর্যবেক্ষণ করুন।

পোল আপস্ট্রিম প্রাইমার:

AGGGTTTCCCAGTCACGGGCTGAG-GATCCTTT

Polh ডাউনস্ট্রিম প্রাইমার:

GAGCGGATAATTTCACACTGGTGTGTG-CAAACTCCTT

Lef-8 আপস্ট্রিম প্রাইমার:

AGGGTTTCCCAGTCACGCACGGGAAAT-GAC

Lef-8 ডাউনস্ট্রিম প্রাইমার:

GAGCGGATAATTTCATTGTACGGATCTTTCGGC

Lef-9 আপস্ট্রিম প্রাইমার

AGGGTTTCCCAGTCACGAAAACGGGTACGCGG

Lef-9 ডাউনস্ট্রিম প্রাইমার:

GAGCGGATAATTTCACATTGTCACGTCAGTC

পরিশেষে, পরিমাপ করা পোল, লেফ-৮, এবং লেফ-৯ সিকোয়েন্সের তুলনা করতে DNAMAN6.0 সফ্টওয়্যার প্রয়োগ করুন।

1.6ডেটা বিশ্লেষণ এবং প্রক্রিয়াকরণ

পরীক্ষামূলক ডেটা IBM SPSS 22.0 ডেটা পরিসংখ্যান বিশ্লেষণ সফ্টওয়্যার ব্যবহার করে প্রক্রিয়া করা হয়েছিল।

ভাইরাসের কীটনাশক কার্যকলাপ নির্ধারণ পরীক্ষায়, প্রতিটি ঘনত্বের সাথে চিকিত্সা করা মৃত এবং জীবিত পোকামাকড়ের সংখ্যা গণনা করা হয়, এবং মৃত্যুর হার এবং সামঞ্জস্যপূর্ণ শতাংশ মৃত গণনা করা হয়, এবং সম্ভাব্যতার মানগুলিতে রূপান্তরিত হয়।প্রতিটি চিকিত্সার ঘনত্ব এলজি মানগুলিতে রূপান্তরিত হয়।ভাইরুলেন্স রিগ্রেশন সমীকরণ (ঢাল ± SE) কার্য সম্ভাবনার মান এবং ওজন এবং LC এর মাধ্যমে গণনা করা হয়₅₀মান এবং এর 95% আত্মবিশ্বাসের সীমা, এবং অবশেষে চি-স্কয়ার পরীক্ষা সম্পাদন করুন(²)ফিল্ড কন্ট্রোল ইফেক্ট পরীক্ষায়, প্রতিটি চিকিৎসায় জীবন্ত পোকামাকড়ের সংখ্যা গণনা করা হয়েছিল, কীটপতঙ্গ হ্রাসের হার গণনা করা হয়েছিল।নিয়ন্ত্রণ প্রভাব মাইক্রোসফ্ট এক্সেল সম্পাদনা সূত্র ব্যবহার করে গণনা করা হয়েছিল।বিশ্লেষণের জন্য ডানকানের পদ্ধতি ব্যবহার করা হয়েছিল, এবং চিকিত্সাগুলির মধ্যে উল্লেখযোগ্য পার্থক্যগুলি তুলনা করার জন্য একমুখী ANOVA ব্যবহার করা হয়েছিল,

পাঠ্যের চার্টগুলি মাইক্রোসফ্ট এক্সেল সফ্টওয়্যার ব্যবহার করে তৈরি করা হয়েছিল।

2.ফলাফল এবং বিশ্লেষণ

2.1স্পোডোপ্টেরা ফ্রুগিপারডা লার্ভার বিরুদ্ধে AcMNPV-এর কীটনাশক কার্যকলাপ

ইনডোর কার্যকলাপ পরীক্ষার ফলাফল (সারণী 1) দেখায় যে চিকিত্সার 7 দিন পরে, এল.সি₅₀স্পোডোপ্টেরা ফ্রুগিপারডার ২য় ইনস্টার লার্ভার উপর AcMNPV কাজ করে 4.1x10⁷PIB/mL, এবং LC₉₀হল 1.05 x10⁸পিআইবি/এমএল10 দিন চিকিৎসার পর এল.সি₅₀2য় ইনস্টার লার্ভার উপর AcMNPV কাজ করে 2.9x10⁷PIB/mL, এবং LC₉₀হল 7.8x10⁷পিআইবি/এমএলএলসি₅₀এবং এলসি₉₀AcMNPV এর 7 দিনের চিকিত্সার পরে ফল আর্মিওয়ার্মের 2য় ইনস্টার লার্ভার উপর কাজ করে উভয়ই 10 দিনের বেশি ছিল, যা নির্দেশ করে যে AcMNPV 7 দিনে স্পোডোপ্টেরা ফ্রুগিপারডা লার্ভার বিরুদ্ধে ভাল কীটনাশক কার্যকলাপ প্রদর্শন করেছে।

2.2 AcMNPV এর ক্ষেত্র নিয়ন্ত্রণ প্রভাব।স্পোডোপ্টেরা ফ্রুগিপারডা লার্ভার উপর বিটি কাজ করে

ক্ষেত্রের কার্যকারিতা পরীক্ষার ফলাফল দেখায় যে 10 মিলিয়ন AcMNPV.Bt SC (1500 mL/hm²) স্পোডোপটেরা ফ্রুগিপারডার লার্ভার উপর তুলনামূলকভাবে ধীর প্রভাব ফেলে।স্প্রে করার পর ১ম, ৩য় এবং ৫ম দিনে গড় নিয়ন্ত্রণ প্রভাব ছিল যথাক্রমে ১১.৫৭%, ১৬.২৩% এবং ১৫.৫৬%।স্প্রে করার পর 7 তম দিনে গড় নিয়ন্ত্রণ প্রভাব ছিল মাত্র 21.88%।যাইহোক, স্প্রে করার 10 তম দিনে, পোকা নিয়ন্ত্রণের প্রভাব হঠাৎ করে 68.99% বেড়ে যায় এবং স্প্রে করার 15 তম দিনে গড় নিয়ন্ত্রণ প্রভাবও 66.87% ছিল।যাইহোক, রাসায়নিক এজেন্টের তুলনায় Emamectin Benzoate+ Indoxair Conditioninggarb 15% (300mL/hm²), এটি স্পডোপটেরা ফ্রুগিপারডা লার্ভার উপর একটি ভাল হত্যার প্রভাব ফেলেছিল, যা দ্রুত পোকামাকড়ের সংখ্যা কমাতে পারে।ওষুধ খাওয়ার পর ১ম, ৩য়, ৫ম এবং ৭ম দিনে গড় নিয়ন্ত্রণ প্রভাব ছিল যথাক্রমে ৯১.৩৯%, ৯২.৬৬%, ৯০.৭১% এবং ৮৭.১৯%।যাইহোক, 10 তম দিনে গড় নিয়ন্ত্রণ প্রভাব কমতে শুরু করে, শুধুমাত্র 67.63%, এবং 15 তম দিনে গড় নিয়ন্ত্রণ প্রভাব কমে 51.60% হয়েছে।বিস্তারিত জানার জন্য টেবিল 2 দেখুন।

একই সময়ে, আমরা আরও দেখতে পেলাম যে চিকিত্সার পর 1ম, 3য় এবং 5ম দিনে নিয়ন্ত্রণ এলাকায় পোকামাকড়ের হ্রাসের হার নেতিবাচক ছিল, যা পোকামাকড়ের সংখ্যা বৃদ্ধির ইঙ্গিত দেয়।চিকিত্সার 7 তম দিনে, এটি ইতিবাচক হতে শুরু করে (পোকা জনসংখ্যা কমতে শুরু করে)।10 তম এবং 15 তম দিনে পোকামাকড়ের গড় হ্রাসের হার ছিল যথাক্রমে 38.25% এবং 47.00%, যা সম্ভবত এই সত্যের সাথে সম্পর্কিত যে স্পোডোপটেরা ফ্রুগিপারডার কিছু লার্ভা মাটিতে পুপেট হতে শুরু করে এবং 10-15 দিন পরে বংশবৃদ্ধি হয়। .

সারসংক্ষেপে দেখা যায় যে ১০ কোটি AcMNPV.Bt SC (1500 mL/hm²) স্পোডোপ্টেরা ফ্রুগিপারডার উপর একটি নির্দিষ্ট নিয়ন্ত্রণ প্রভাব রয়েছে, তবে এর প্রভাব ধীর, এবং প্রয়োগের প্রায় 10-15 দিন পরে এর কার্যকারিতা।

2.3 AcMNPV এর প্রভাব।প্রাকৃতিক শত্রুদের উপর Bt

ক্ষেত্রের পরীক্ষা-নিরীক্ষার সময়, 10 মিলিয়ন AcMNPV এর প্রভাব।ভুট্টার প্রাকৃতিক শত্রু যেমন মাকড়সা, লেডিবগ এবং বিটলসের উপর বিটি সাসপেনশনও তদন্ত করা হয়েছিল।ফলাফলে দেখা গেছে 10 মিলিয়ন AcMNPV.বিটি সাসপেনশন প্রাকৃতিক শত্রু যেমন মাকড়সা, লেডিবগ এবং বিটলসের উল্লেখযোগ্য ক্ষতি করেনি, প্রতি 100টি গাছে গড়ে 13.4 প্রাকৃতিক শত্রু রয়েছে।যাইহোক, রাসায়নিক এজেন্ট Emamectin Benzoate+ Indoxair Conditioningarb 15% সাসপেনশন প্রাকৃতিক শত্রু যেমন মাকড়সা, লেডিবগ এবং বিটলসের উপর উল্লেখযোগ্য বিষাক্ত প্রভাব ফেলেছে।চিকিত্সার পর প্রথম দিনে, 100টি ভুট্টার গাছে প্রাকৃতিক শত্রুর গড় সংখ্যা ছিল মাত্র 3.1, এবং চিকিত্সার পরে তৃতীয় দিনে, বিভিন্ন ধরণের (চিত্র 1) মাত্র 5.2 প্রাকৃতিক শত্রু পাওয়া গেছে।এতে দেখা যায় ১০ কোটি এসিএমএনপিভি।বিটি সাসপেনশন কীটপতঙ্গের প্রাকৃতিক শত্রুদের উপর একটি ভাল প্রতিরক্ষামূলক প্রভাব ফেলে, অন্যদিকে Emamectin Benzoate+ Indoxair Conditioninggarb 15% সাসপেনশন প্রাকৃতিক শত্রুদের তুলনামূলকভাবে বেশি ক্ষতি করে।

2.4 AcMNPV এর আণবিক সনাক্তকরণ

বিভিন্ন পরীক্ষার নমুনার পিসিআর পরিবর্ধন ফলাফল দেখায় যে নমুনা 1, 2, 3, এবং 4-এর পোল্হ, লেফ-8, এবং লেফ-9-এর পরিবর্ধনের খণ্ডগুলি সামঞ্জস্যপূর্ণ এবং আকারে সঠিক ছিল।polh, lef-8, এবং lef-9 জিনের PCR পণ্যগুলি যথাক্রমে 0.54, 0.716, এবং 0.29 kb ছিল (চিত্র 2), যা প্রমাণ করে যে AcMNPV-এর স্পোডোপটেরা ফ্রুগিপারডার লার্ভার বিরুদ্ধে কীটনাশক কার্যকলাপ রয়েছে।

অবশেষে, ডিএনএএমএন 6.0 সফ্টওয়্যারটি নমুনা 1, 2, 3, এবং 4 (চিত্র 3) এ পোল্হ, লেফ-8, এবং লে.এফ-9 এর পরিবর্ধিত টুকরোগুলিতে সিকোয়েন্স অ্যালাইনমেন্ট করতে ব্যবহৃত হয়েছিল।ফলাফলগুলি দেখায় যে নমুনা 1, 2, 3, এবং 4-এ পোল্হ, লেফ-8, এবং লেফ-9-এর পরিবর্ধিত ক্রমগুলির মধ্যে সাদৃশ্য ছিল 100%, ইঙ্গিত করে যে নমুনা 1, 2, 3 এবং 4 সবগুলি থেকে উদ্ভূত। একই ভাইরাস AcMNPV।

3. আলোচনা

AcMNPV হল একটি পোকামাকড়ের রড-আকৃতির ভাইরাস যা খাওয়ানোর মাধ্যমে পোকামাকড়ের শরীরে সংক্রমিত হয়।ভাইরাসটি পোকামাকড়ের পুরো শরীরে ছড়িয়ে পড়ে এবং ধীরে ধীরে পুরো শরীরকে সংক্রমিত করে এবং শেষ পর্যন্ত মৃত্যুর দিকে নিয়ে যায়।এই সমীক্ষার ফলাফলগুলি নির্দেশ করে যে AcMNPV-এর স্পোডোপ্টেরা ফ্রুগিপারডার লার্ভার বিরুদ্ধে ভাল জৈবিক কার্যকলাপ রয়েছে।7 তম এবং 10 তম দিনে এর LC ছিল যথাক্রমে 4.1x107 এবং 2.9x107PIB/m, এবং এটি ক্ষেত্রে ভাল নিয়ন্ত্রণ প্রভাব দেখায়।10 মিলিয়ন AcMNPV.Bt এর মিশ্র সাসপেনশন (1500 mL/hm²) চিকিত্সার পর 10 তম এবং 15 তম দিনে ভাল গড় নিয়ন্ত্রণ প্রভাব ছিল, যথাক্রমে 68.99% এবং 66.87% এ পৌঁছেছিল এবং প্রাকৃতিক শত্রুদের জন্য নিরাপদ ছিল।অতএব, গবেষণা ও বিকাশের গতি ত্বরান্বিত করা উচিত যাতে AcMNPV স্পোডোপ্টেরা ফ্রুগিপারডার জৈবিক নিয়ন্ত্রণে আরও বেশি ভূমিকা পালন করতে পারে।উহান চুকিয়াং বায়োটেকনোলজি কোং লিমিটেড দ্বারা উত্পাদিত 10 মিলিয়ন AcMNPV.Bt সাসপেনশন হল AcMNPV এবং বায়োপেস্টিসাইড ব্যাসিলাস থুরিংজিনসিস (Bt) এর একটি যৌগ, যা ভাইরাসের কীটনাশক কার্যকলাপকে উল্লেখযোগ্যভাবে উন্নত করতে পারে।কারণ Bt হল একটি বিস্তৃত-স্পেকট্রাম কীটনাশক যা ভাল মাইক্রোবায়াল কীটনাশক কার্যকলাপ সহ, যখন AcMNPV Bt-এর সাথে একত্রিত হয়, তখন একটি একক ফর্মুলেশনের তুলনায় এর বিষাক্ততা উল্লেখযোগ্যভাবে উন্নত হওয়া উচিত।এটি শুধুমাত্র Bt-এর কীটনাশক পরিসরকে প্রসারিত করে না, বরং এর বিষাক্ততাও বাড়ায়, একাধিক কীটপতঙ্গ নিয়ন্ত্রণের জন্য একক ফর্মুলেশন ব্যবহার করার লক্ষ্য অর্জন করে।এই কারণেই 10 মিলিয়ন AcMNPV.Bt সাসপেনশন শাকসবজি, ফল গাছ এবং ধানে ব্যাপকভাবে প্রচার করা যেতে পারে।অতএব, 10 মিলিয়ন AcMNPV.Bt ভুট্টায় Spodoptera frugiperda জন্য একটি সবুজ নিয়ন্ত্রণ এজেন্ট হিসাবে প্রচার করা যেতে পারে

এই সমীক্ষায়, ক্ষেত্রের কার্যকারিতা পরীক্ষা পরিচালনা করার সময়, নিয়ন্ত্রণ এলাকায় পোকামাকড়ের জনসংখ্যা দ্রুত হ্রাসের ক্ষেত্রে (15তম দিনে পোকার হ্রাসের হার 47.00% এ পৌঁছেছে) 10 মিলিয়ন AcMNPV.Bt এর গড় নিয়ন্ত্রণ প্রভাব সাসপেনশন (1500mL/hm²) চিকিত্সার পরে 15 তম দিনে 66.87% ছিল, একটি দ্রুত ঊর্ধ্বমুখী প্রবণতা দেখায়।রাসায়নিক কীটনাশকের গড় নিয়ন্ত্রণ প্রভাব 15% মেথোক্সাজল · ইনডেফেনকার্ব এসসি (300 মিলি/এইচএম²) চিকিত্সার পরে 15 তম দিনে 51.60% কমে যায়।যদিও দেখা যায় যে 10 মিলিয়ন AcMNPV.Bt সাসপেনশন (1500 mL/hm²) 10 থেকে 15 তম দিনে স্পোডোপ্টেরা ফ্রুগিপারডার উপর একটি নির্দিষ্ট নিয়ন্ত্রণের প্রভাব রয়েছে, জৈবিক কীটনাশকের ধীর কার্যকারিতা এবং স্পোডোপ্টেরা ফ্রুগিপারডা লার্ভার স্বল্প জীবনকাল এবং ওভারল্যাপিং প্রজন্ম বিবেচনা করে, তদন্তের সংখ্যা বাড়ানো এবং তদন্তের সময় বাড়ানোর সুপারিশ করা হয়। জৈবিক কীটনাশকের ক্ষেত্রের কার্যকারিতা পরীক্ষা পরিচালনা করা (বিশেষ করে ভাইরাল প্রস্তুতি), যা আরও আদর্শ পরীক্ষামূলক ফলাফল অর্জন করতে পারে।এটিও এই গবেষণার একটি সীমাবদ্ধতা।সংক্ষেপে, জৈবিক এজেন্টের তুলনায়, রাসায়নিক এজেন্ট কীটপতঙ্গের উপর তুলনামূলকভাবে বেশি প্রভাব ফেলে এবং দ্রুত প্রভাব ফেলে।এগুলি কীটপতঙ্গের প্রাদুর্ভাবের সময় জরুরী প্রতিরোধ এবং নিয়ন্ত্রণ ব্যবস্থা হিসাবে ব্যবহার করা যেতে পারে।যখন কীটপতঙ্গের ক্ষতি তুলনামূলকভাবে হালকা হয়, তখন জৈবিক কীটনাশক রাসায়নিক কীটনাশকগুলিকে সবুজ প্রতিরোধ ও নিয়ন্ত্রণ ব্যবস্থাগুলির মধ্যে একটি হিসাবে প্রতিস্থাপন করতে পারে, যার ফলে পরিবেশ দূষণ হ্রাস পায় এবং কৃষি বাস্তুসংস্থান রক্ষার প্রভাব অর্জন করে।

উপরন্তু, এই গবেষণায় ব্যবহৃত Polh (পলিহেড্রিন) জিন হল এক ধরনের পলিহেড্রাল প্রোটিন প্রোমোটার, এটি এবং P10 হল ব্যাকুলোভাইরাস এক্সপ্রেশন ভেক্টর সিস্টেমে (BEVS) সবচেয়ে বেশি ব্যবহৃত প্রোমোটার, যেগুলির উভয়ই শেষ পর্যায়ে অত্যন্ত প্রকাশ পায়। ভাইরাল সংক্রমণের^[১৩].যাইহোক, p10 প্রোমোটারের ক্রিয়াকলাপ পোল্হ প্রোমোটারের তুলনায় কম, তাই পোল প্রোমোটার প্রায়শই এক্সোজেনাস প্রোটিনের প্রকাশের জন্য ব্যবহৃত হয়।Lef-8 জিন ভাইরাসের নিজস্ব RNA পলিমারেজের বৃহত্তম সাবইউনিটকে এনকোড করতে পারে এবং এটি এক প্রকার দেরী প্রকাশের ফ্যাক্টর^[১৪].lef-9 হল এক প্রকার দেরী এক্সপ্রেশন ফ্যাক্টর যা ব্যাকুলোভাইরাসে lef-4, lef-8 এবং p47 সহ প্রোটিন কমপ্লেক্স সাবুনিটকে এনকোড করে।গবেষণায় দেখা গেছে যে Lef-9 জিনের অভাব থাকা ভাইরাসগুলি সংক্রামক কার্যকলাপের সাথে ভাইরাসের কণা তৈরি করতে পারে না, যখন lef-9 জিনের সাথে ভাইরাসগুলি এটিকে পুনরুদ্ধার করে ভাইরাসের সংক্রামক কার্যকলাপ পুনরুদ্ধার করতে পারে।তাই, বাকুলোভাইরাস সংক্রামক কার্যকলাপ সহ BV (বাডেড ভাইরাস) গঠনের জন্য lef-9 জিন একটি অপরিহার্য জিন।^[১৫].এটি দেখা যায় যে লেফ-8 এবং লেফ-9 জিনগুলির বিভিন্ন ধরণের নিউক্লিয়ার পলিহেড্রোসিস ভাইরাসে উচ্চ রক্ষণশীলতা রয়েছে, তাই লেফ-8 এবং লেফ-9 জিনগুলি ভাইরাসের ধরন সনাক্তকরণের ভিত্তি হিসাবে ব্যবহার করা যেতে পারে।অতএব, এই গবেষণায় শনাক্তকরণ বস্তু হিসেবে পোল্হ, লেফ-৮, এবং লেফ-৯ ব্যবহার করা হয়েছে এবং জিন সিকোয়েন্স অ্যালাইনমেন্টের মাধ্যমে, হোমোলজি উচ্চমাত্রায় ছিল, সবই 100% পর্যন্ত পৌঁছেছে।দ্রুত আণবিক সনাক্তকরণ পদ্ধতি আবারও যাচাই করেছে যে AcMNPV এর স্পোডোপ্টেরা ফ্রুগিপারডার বিরুদ্ধে ভাল কীটনাশক কার্যকলাপ রয়েছে, যা স্পোডোপ্টেরা ফ্রুগিপারডা প্রতিরোধ ও নিয়ন্ত্রণে আরও প্রচার এবং প্রয়োগের জন্য উপযুক্ত।

2019 সাল থেকে, স্পোডোপ্টেরা ফ্রুগিপারডা চীন আক্রমণ করেছে এবং ভুট্টার একটি গুরুত্বপূর্ণ কীটপতঙ্গ হয়ে উঠেছে।এটি দক্ষিণ ও দক্ষিণ-পশ্চিম চীনের কিছু অঞ্চলে বসতি স্থাপন করেছে, চীনের ভুট্টা শিল্পের ব্যাপক ক্ষতি করেছে এবং চীনের খাদ্য নিরাপত্তাকে মারাত্মকভাবে হুমকির মুখে ফেলেছে।^[১৬].চীনে স্পোডোপ্টেরা ফ্রুগিপারদার বর্তমান গুরুতর প্রতিরোধ ও নিয়ন্ত্রণ পরিস্থিতির মুখোমুখি হয়ে, স্পোডোপ্টেরা ফ্রুগিপারডা প্রতিরোধ ও নিয়ন্ত্রণের জন্য দক্ষ কীটনাশক স্ক্রীনিং এবং বিকাশকে ত্বরান্বিত করা জরুরি।^[১৭].যদিও ভাইরাল কীটনাশকগুলি তাদের ক্রিয়াকলাপের ধীর গতি এবং সংকীর্ণ কীটনাশক বর্ণালীর কারণে তাদের ব্যাপক প্রয়োগ সীমিত করেছে, বাস্তুবিদ্যা এবং পরিবেশ সুরক্ষার প্রতি ক্রমবর্ধমান মনোযোগের পরিপ্রেক্ষিতে, ব্যাকুলোভাইরাস কীটনাশক তাদের উল্লেখযোগ্য সুবিধার কারণে কৃষি উৎপাদনে ক্রমবর্ধমানভাবে ব্যবহৃত হবে বলে আশা করা হচ্ছে। ঐতিহ্যগত কীটনাশক।উচ্চ তাপমাত্রা, সূর্যালোক, বৃষ্টি এবং কীটপতঙ্গের বয়সের মতো বাহ্যিক পরিস্থিতিতে পোকামাকড়ের ভাইরাসের প্রস্তুতির সংবেদনশীলতার কারণে[18]।তাই, কীটনাশক প্রয়োগ করার পরামর্শ দেওয়া হয় পোকামাকড়ের লার্ভা হওয়ার সর্বোচ্চ সময়ে।উচ্চ তাপমাত্রা এবং আলোর মতো প্রতিকূল পরিবেশগত অবস্থার প্রভাব এড়াতে রৌদ্রোজ্জ্বল দিনে বিকাল 4:00-5:00 এর পরে এটি ব্যবহার করা ভাল, যাতে ভাইরাস গঠন আরও ভালভাবে তার ভূমিকা পালন করতে পারে এবং কীটপতঙ্গ নিয়ন্ত্রণের প্রভাবকে উন্নত করতে পারে। .